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當前位置:教育論文中心首頁--碩士論文--1型鴨甲肝病毒膠體金試紙條的研制
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1型鴨甲肝病毒膠體金試紙條的研制
 
     論文目錄
 
符號說明第5-10頁
中文摘要第10-12頁
英文摘要第12-14頁
1 前言第14-25頁
    1.1 鴨肝炎病毒的概述第14-16頁
        1.1.1 DHAV-1 歷史分布與分類地位第14-15頁
        1.1.2 DHAV-1 的理化特性第15頁
        1.1.3 DHAV-1 的基因組及其結構第15-16頁
        1.1.4 DHAV-1 編碼的蛋白及其功能第16頁
    1.2 DHAV-1 的流行病學第16-17頁
        1.2.1 發生與分布第16頁
        1.2.2 DHAV-1 的主要宿主和傳播途徑第16-17頁
    1.3 DHAV-1 的臨床癥狀與病理變化第17頁
    1.4 DHAV-1 的預防和治療第17-18頁
    1.5 DHAV-1 的主要診斷方法第18頁
    1.6 免疫膠體金診斷技術的概述第18-20頁
        1.6.1 免疫膠體金診斷技術的原理第18-19頁
        1.6.2 免疫膠體金診斷技術的發展史第19-20頁
        1.6.3 免疫膠體金診斷技術的4種主要方法第20頁
        1.6.4 免疫膠體金診斷技術特點第20頁
    1.7 免疫膠體金診斷技術的應用第20-24頁
        1.7.1 免疫膠體金技術在動物疾病診斷中的應用第20-21頁
        1.7.2 免疫膠體金診斷技術在人醫中的應用第21-23頁
        1.7.3 免疫膠體金技術在抗體檢測方面的應用第23頁
        1.7.4 免疫膠體金快速診斷技術在飲食安全方面的應用第23-24頁
    1.8 本論文的研究意義第24-25頁
2 材料與方法第25-40頁
    2.1 材料第25-28頁
        2.1.1 菌株第25頁
        2.1.2 酶和相關試劑第25頁
        2.1.3 試驗動物及細胞株第25頁
        2.1.4 主要儀器第25頁
        2.1.5 主要溶液第25-28頁
    2.2 方法第28-40頁
        2.2.1 鴨肝炎病毒的增殖與純化第28頁
            2.2.1.1 病毒的增殖第28頁
            2.2.1.2 病毒的純化第28頁
        2.2.2 重組表達質粒p ET32a-VP1的驗證第28-29頁
            2.2.2.1 酶切鑒定第28-29頁
            2.2.2.2 測序鑒定第29頁
        2.2.3 重組質粒在大腸桿菌Rosetta(DE3)PLys中的表達第29頁
        2.2.4 表達產物的Western blot鑒定分析第29-30頁
        2.2.5 DHAV-1 VP1蛋白的純化第30頁
        2.2.6 DHAV-1 VP1蛋白含量的測定第30頁
        2.2.7 DHAV-1 VP1蛋白免疫BALB/c小鼠第30-33頁
            2.2.7.1 對DHAV-1 多抗不同階段效價測定分析第31頁
            2.2.7.2 多克隆抗體的純化第31-32頁
            2.2.7.3 單克隆抗體 4E6的復蘇第32頁
            2.2.7.4 腹水的制備第32頁
            2.2.7.5 腹水的純化第32-33頁
            2.2.7.6 純化產物的SDS-PAGE鑒定分析第33頁
            2.2.7.7 4E6腹水效價的測定第33頁
            2.2.7.8 測定 4E6的蛋白濃度第33頁
        2.2.8 金標單克隆抗體的制備第33-35頁
            2.2.8.1 待標記蛋白質的準備第33頁
            2.2.8.2 膠體金標記抗體的最適p H第33-34頁
            2.2.8.3 膠體金標記抗體最低穩定量的測定第34頁
            2.2.8.4 膠體金標記抗體第34-35頁
            2.2.8.5 金標抗體的純化第35頁
            2.2.8.6 金標抗體復溶液配方的選擇第35頁
        2.2.9 膠體金試紙條膜材料的選擇第35-39頁
            2.2.9.1 樣品墊的選擇第35-36頁
            2.2.9.2 樣品墊處理液的選擇第36頁
            2.2.9.3 金標墊的選擇第36頁
            2.2.9.4 金標墊處理液的選擇第36-37頁
            2.2.9.5 金標抗體稀釋度的選擇第37頁
            2.2.9.6 硝酸纖維素膜的選擇第37頁
            2.2.9.7 NC膜包被T線和C線濃度的摸索第37-38頁
            2.2.9.8 包被液的選擇第38頁
            2.2.9.9 吸水墊的選擇第38頁
            2.2.9.10 PVC底板的選擇第38-39頁
            2.2.9.11 免疫層析試紙條的組裝第39頁
        2.2.10 膠體金試紙條性能的驗證第39-40頁
            2.2.10.1 敏感性試驗第39頁
            2.2.10.2 特異性試驗第39頁
            2.2.10.3 穩定性試驗第39頁
            2.2.10.4 臨床驗證第39-40頁
3 結果與分析第40-49頁
    3.1 病毒的增殖與純化結果第40頁
    3.2 重組質粒p ET32a-VP1的酶切鑒定與誘導表達條件的摸索第40-43頁
        3.2.1 酶切鑒定結果第40-41頁
        3.2.2 測序結果第41頁
        3.2.3 DHAV-1 VP1基因誘導表達條件的優化第41頁
        3.2.4 DHAV-1 VP1蛋白的純化效果第41-42頁
        3.2.5 DHAV-1 VP1蛋白含量的測定結果第42頁
        3.2.6 Western blot分析結果第42-43頁
    3.3 抗DHAV-1 多克隆抗體的制備及純化第43-45頁
        3.3.1 BALB/c小鼠的免疫及雜交瘤細胞的培養結果第43頁
        3.3.2 針對不同時段多抗效價測定結果第43-44頁
        3.3.3 BALB/c小鼠腹水的效價結果第44頁
        3.3.4 單克隆抗體純化效果的鑒定第44-45頁
    3.4 免疫層析試紙條體系的優化結果第45頁
        3.4.1 膠體金顆粒大小的選擇第45頁
        3.4.2 膠體金標記抗體最低穩定量的測定結果第45頁
        3.4.3 金標抗體復溶液配方的選擇結果第45頁
    3.5 免疫層析試紙條膜材料的選擇第45-47頁
        3.5.1 樣品墊的選擇第45頁
        3.5.2 樣品墊處理液的選擇結果第45-46頁
        3.5.3 金標墊的選擇結果第46頁
        3.5.4 金標墊處理液的選擇第46頁
        3.5.5 金標抗體稀釋度的選擇第46頁
        3.5.6 硝酸纖維素膜的選擇第46頁
        3.5.7 NC膜包被T線、C線濃度的確定第46頁
        3.5.8 包被液的確定第46-47頁
    3.6 膠體金試紙條的性能測試結果第47-49頁
        3.6.1 特異性第47頁
        3.6.2 敏感性第47-48頁
        3.6.3 重復性第48頁
        3.6.4 穩定性第48頁
        3.6.5 臨床驗證第48-49頁
4 討論第49-52頁
    4.1 重組表達質粒p ET32a-VP1的驗證第49頁
    4.2 抗DHAV-1 多抗的制備第49頁
    4.3 4E6腹水的制備第49-50頁
    4.4 4E6單抗的純化第50頁
    4.5 膠體金顆粒大小的選擇第50頁
    4.6 硝酸纖維素膜的選擇第50頁
    4.7 膠體金試紙條T線不出線及顯色淺的問題第50-51頁
    4.8 關于膠體金試紙條出現假陽性的問題第51頁
    4.9 關于膠體金試紙條檢測DHAV-1 和DHAV-3 均呈陽性反應的問題第51-52頁
5 結論第52-53頁
參考文獻第53-59頁
致謝第59頁

 
 
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