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當前位置:教育論文中心首頁--碩士論文--中華蜜蜂MKK6基因介導的MAPK級聯途徑在氧化應激中的功能分析
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中華蜜蜂MKK6基因介導的MAPK級聯途徑在氧化應激中的功能分析
 
     論文目錄
 
符號說明第4-9頁
中文摘要第9-11頁
Abstract第11-12頁
1 前言第13-24頁
    1.1 中華蜜蜂的生物學特征及重要地位第13-14頁
    1.2 MAPK級聯途徑的概述第14-18頁
        1.2.1 MAPK級聯途徑的組成第14-16頁
        1.2.2 MAPK信號通路的主要途徑第16-18頁
    1.3 MAPK級聯途徑的生物學功能第18-21頁
        1.3.1 MAPK級聯途徑在氧化應激中的作用第18-19頁
        1.3.2 MAPK級聯途徑在免疫中的作用第19-20頁
        1.3.3 MAPK級聯途徑在生長發育中的作用第20頁
        1.3.4 MAPK級聯途徑在疾病中的作用第20-21頁
    1.4 MKK6 基因的概述第21-22頁
        1.4.1 MKK6 的結構第21-22頁
        1.4.2 MKK6 的研究進展第22頁
    1.5 本研究的目的及意義第22-24頁
2 材料與方法第24-41頁
    2.1 材料第24-26頁
        2.1.1 昆蟲材料第24頁
        2.1.2 菌株與質粒第24頁
        2.1.3 酶與其他生化試劑第24頁
        2.1.4 引物第24-26頁
        2.1.5 網絡資源和生物學軟件第26頁
            2.1.5.1 網絡資源第26頁
            2.1.5.2 生物學軟件第26頁
    2.2 實驗方法第26-41頁
        2.2.1 中華蜜蜂的飼養與處理第26-27頁
        2.2.2 中華蜜蜂總RNA的提取第27-28頁
        2.2.3 cDNA第一鏈的合成第28頁
        2.2.4 中華蜜蜂AccMKK6及Acckayak基因開放閱讀框的獲取第28-29頁
        2.2.5 目的DNA的回收、連接及轉化第29-31頁
            2.2.5.1 目的DNA的回收第29-30頁
            2.2.5.2 目的DNA與載體的連接第30頁
            2.2.5.3 大腸桿菌感受態細胞的轉化第30-31頁
        2.2.6 大腸桿菌質粒DNA的提取與酶切鑒定第31-32頁
            2.2.6.1 試劑盒微量法提取質粒DNA第31頁
            2.2.6.2 大腸桿菌質粒DNA的酶切第31-32頁
        2.2.7 實時熒光定量PCR分析基因的表達情況第32頁
            2.2.7.1 內參引物、反應體系與反應條件第32頁
            2.2.7.2 數據處理第32頁
        2.2.8 目的基因的原核表達第32-34頁
            2.2.8.1 目的基因原核表達載體的構建第33頁
            2.2.8.2 重組蛋白的誘導表達第33頁
            2.2.8.3 SDS-聚丙烯酰胺凝膠電泳(SDS-PAGE)第33-34頁
        2.2.9 抗體的制備第34頁
        2.2.10 Western blot分析第34-35頁
            2.2.10.1 轉膜第35頁
            2.2.10.2 抗體的孵育第35頁
        2.2.11 抑菌實驗第35頁
        2.2.12 雙鏈RNA(dsRNA)的合成及AccMKK6 沉默第35-37頁
            2.2.12.1 dsRNA合成模板的獲得第35-36頁
            2.2.12.2 dsRNA的合成第36頁
            2.2.12.3 dsRNA的注射第36-37頁
        2.2.13 Acc MKK6 基因沉默后樣品中的抗氧化酶的活性第37-39頁
            2.2.13.1 BCA法定量檢測蛋白濃度第37頁
            2.2.13.2 檢測Acc MKK6 沉默樣品中MDA含量第37-38頁
            2.2.13.3 檢測Acc MKK6 沉默樣品的總超氧化物歧化酶(T-SOD)活力第38-39頁
            2.2.13.4 檢測Acc MKK6 沉默樣品的POD活性第39頁
        2.2.14 酵母雙雜交實驗驗證互作關系第39-40頁
            2.2.14.1 酵母感受態細胞的制備第39-40頁
            2.2.14.2 酵母感受態細胞的轉化第40頁
        2.2.15 GST pull-down 實驗第40-41頁
3 結果與分析第41-56頁
    3.1 中華蜜蜂Acc MKK6 基因分離及生物信息學分析第41-43頁
        3.1.1 中華蜜蜂AccMKK6 基因的分離第41頁
        3.1.2 中華蜜蜂AccMKK6 編碼的氨基酸序列分析第41-43頁
    3.2 中華蜜蜂Acc MKK6 基因表達特性分析第43-46頁
        3.2.1 中華蜜蜂AccMKK6 基因在不同發育時期與不同組織部位中的表達特性分析第43頁
        3.2.2 中華蜜蜂AccMKK6 基因在不同非生物脅迫中的表達特性分析第43-44頁
        3.2.3 環境脅迫下Acc MKK6 蛋白的表達特性分析第44-46頁
    3.3 重組AccMKK6 蛋白在氧化應激中的保護作用第46-47頁
        3.3.1 重組AccMKK6 蛋白的原核表達第46頁
        3.3.2 抑菌實驗分析重組Acc MKK6 蛋白功能第46-47頁
    3.4 RNAi介導的中華蜜蜂AccMKK6 基因沉默第47-50頁
        3.4.1 中華蜜蜂AccMKK6 基因沉默效率的檢測第47-48頁
        3.4.2 Acc MKK6 基因沉默對中華蜜蜂的影響第48-50頁
            3.4.2.1 中華蜜蜂AccMKK6 基因沉默后抗氧化基因的檢測第48-49頁
            3.4.2.2 中華蜜蜂AccMKK6 基因沉默后酶活的檢測第49-50頁
    3.5 中華蜜蜂Acc MKK6和Accp38b相互關系第50頁
    3.6 中華蜜蜂Accp38b和 Acckayak相互關系第50-54頁
        3.6.1 中華蜜蜂Acckayak基因的分離第51頁
        3.6.2 中華蜜蜂Acckayak編碼的氨基酸序列分析第51-53頁
        3.6.3 中華蜜蜂Accp38b與 Acckayak相互作用第53頁
        3.6.4 中華蜜蜂Acckayak基因在不同非生物脅迫中的表達特性分析第53-54頁
    3.7 中華蜜蜂Acc MKK6 沉默后Accp38b和 Acckayak的表達量第54-56頁
4 討論第56-60頁
    4.1 AccMKK6 具有高度保守性第56頁
    4.2 Acc MKK6 響應非生物脅迫引起的氧化應激反應第56-57頁
    4.3 Acc MKK6 基因沉默對中華蜜蜂的影響第57-59頁
    4.4 AccMKK6-Accp38b-Acckayak級聯途徑調控中華蜜蜂抗氧化應激第59-60頁
5 結論第60-61頁
參考文獻第61-69頁
致謝第69-70頁
攻讀學位期間發表的論文及成果第70頁

 
 
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